許多測試要求在無菌條件下進(jìn)行.主要原因是:

一，確保作人員的安全

防止檢測出的病原菌因操作不當(dāng)而造成個(gè)人污染.
1.無菌操作要求1.接種細(xì)菌時(shí)必須穿工作服，戴工作帽.
2.接種食品樣品時(shí)，必須穿專用工作服、帽子和拖鞋，放在無菌室緩沖室，工作前用紫外線消毒使用.
3.接種食品樣品時(shí)，進(jìn)入無菌室前用肥皂洗手，用75%的酒精棉球擦手.
4.接種使用的吸管、平盤和培養(yǎng)基等必須消毒滅菌，打開未使用的盤子，放置后不能使用，金屬器具必須用高壓滅菌或95%的酒精燃燒3次后使用.
5.從包裝中取出吸管時(shí)，吸管的尖端不得接觸露出部位，使用吸管接觸試管或平盤時(shí)，吸管的尖端不得接觸試管或平盤的邊緣.
6.接種樣品、轉(zhuǎn)種細(xì)菌必須在酒精燈前操作，接種細(xì)菌或樣品時(shí)，吸管從包裝中取出后，打開試管塞必須用火焰消毒.
7.接種環(huán)和針在接種細(xì)菌前用火焰燒毀所有金屬線，必要時(shí)燒毀環(huán)和針與棒的連接部，接種結(jié)核菌和烈性菌的接種環(huán)在沸水中煮沸5min，用火焰燒毀.8.吸管吸收菌液或樣品時(shí)，應(yīng)使用相應(yīng)的橡膠頭吸收，不得直接用口吸收.二.無菌之間的使用要求1.

無菌之間通向外部的窗戶必須是雙層玻璃，密封，無菌之間的大小不得隨意打開緩沖間和拉門，設(shè)置0.5-0.7m2的小窗戶，以備進(jìn)入無菌之間傳遞物品.2.無菌之間應(yīng)保持潔凈，工作后用2%-3%的煤酚皂溶液消毒，擦拭工作臺(tái)面，不得存放與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的物品.3.在無菌之間使用前后關(guān)閉門，打開紫外線燈室內(nèi)懸掛紫外線燈消毒時(shí)，需要30W紫外線燈，距離1.0m，照射時(shí)間在30min以上，使用紫外線燈時(shí)，請注意不要直接在紫外線下操作，以免損傷4.處理和接種食品標(biāo)本時(shí)，進(jìn)入無菌間操作，不得隨意進(jìn)出.如果需要傳遞物品，可以在窗戶上傳遞.5.無菌之間需要設(shè)置空調(diào)時(shí)，需要過濾裝置.

二、消毒滅菌要求微生物檢測用玻璃器具

金屬器具和培養(yǎng)基、污染和接種的培養(yǎng)物等，必須滅菌后使用.

干熱和濕熱高壓蒸汽鍋的滅菌方法
1、滅菌前準(zhǔn)備好的
(1)所有需要滅菌的東西都要先洗干凈，玻璃器具如吸管、平盤用紙包裝嚴(yán)密，用金屬筒打開上面的通氣孔.

(2)安裝培養(yǎng)基的三角瓶塞，用紙包好，試管蓋好，注射器抽出管芯，用紗布包好.2.放置(1)干熱滅菌器:放置物品不能擠壓，也不能接觸箱子的四壁.

(2)大型高壓蒸汽鍋:放置滅菌物分別包裹，直接放入消毒筒內(nèi)，物品之間不得擠壓.3.設(shè)備檢查(1)檢查門開關(guān)是否靈活，橡膠圈是否損壞，是否平整.

(2)檢查壓力表蒸汽排出時(shí)是否停留在零位置，關(guān)閉門和蓋子，蒸汽和加熱后，觀察空氣是否泄漏，壓力表和溫度計(jì)表示的情況是否一致，管道是否堵塞.

(3)對于有自動(dòng)電子程序控制裝置的滅菌器，在使用前檢查規(guī)定的程序，是否符合滅菌處理的要求.4.滅菌處理(1)干熱滅菌法:該方法適用于干熱時(shí)不破損、不變質(zhì)、不蒸發(fā)的物品、玻璃器皿、金屬制品、陶瓷制品等滅菌.

①器械容器清洗后干燥，以免附著在表面的污垢炭化.

②滅菌時(shí)放置物品不要擠壓，不要直接接觸底部和箱壁，物品之間留有間隙.

③菌時(shí)關(guān)閉箱門，接通電源，首先打開排氣孔約30min，排除滅菌器中的冷空氣，溫度上升到160℃調(diào)節(jié)指示燈，維持1.5?2小時(shí).④滅菌結(jié)束后或溫度上升時(shí)，必須在60℃以下打開箱門.

2、手提式高壓鍋或立式壓力蒸汽滅菌器的使用應(yīng)按以下步驟進(jìn)行:
①手提式高壓鍋在主體內(nèi)加入3L清水，立式高壓鍋加水16L(重復(fù)使用時(shí)補(bǔ)充水量，水變混濁需要更換).

②手提式壓力鍋將頂蓋的排氣管插入消毒罐內(nèi)壁的方管中(無軟管或軟管銹蝕破裂的滅菌器不得使用).

③蓋上蓋子擰緊，不漏氣的滅菌器放在火源上加熱，立式壓力鍋通過電源，打開頂蓋的排氣閥放入冷氣閥(水沸騰后排氣閥10-15min)的滅菌器.

③蓋子擰緊頂蓋子，不漏氣的滅氣的滅氣體壓力，放入火源，立即取消除壓力，立即取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力.

⑤取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力.

②夾層達(dá)到預(yù)定溫度后，打開鍋室進(jìn)氣閥，將蒸汽引入鍋室，鍋室內(nèi)冷空氣經(jīng)鍋室阻氣器自動(dòng)排出.

③鍋室達(dá)到規(guī)定的壓力和溫度時(shí)，調(diào)節(jié)吸氣閥，保持恒定④自然或人工冷卻到60℃后開門取物，不得使用快速排出蒸汽法，以免突然降壓，液體劇烈沸騰或容器爆破.

⑤使用自動(dòng)程序控制式壓力蒸汽滅菌器，放置物品關(guān)閉門后，根據(jù)物品類別按下相應(yīng)的開關(guān)，按要求自動(dòng)滅菌，滅菌時(shí)必須使用附屬儀表記錄溫度和時(shí)間，操作要求嚴(yán)格按照制造商的說明書進(jìn)行.5.滅菌溫度和時(shí)間(1)干熱滅菌器滅菌溫度為160℃，為1.5-2h.(2)壓力蒸汽滅菌鍋的滅菌溫度和時(shí)間
(3)間歇性滅菌方法

1.滅菌方法
壓力不大的蒸汽進(jìn)行滅菌，有些物質(zhì)通過高壓蒸汽滅菌容易破壞，可以用這種方法滅菌.

(1)將想要滅菌的東西放入鍋中，蓋上蓋子，打開排水口，排出器內(nèi)的馀水.

(2)關(guān)閉排水口，打開進(jìn)氣門，必要時(shí)消毒10~20min.

(3)滅菌后關(guān)閉進(jìn)氣門，取出物品冷卻到室溫，放入37℃的溫箱過夜，第二天用上述方法消毒，這樣3次就能達(dá)到滅菌的目的.2.血清凝固器的使用方法:如果培養(yǎng)基中含有血清和蛋的特殊成分，高熱會(huì)破壞營養(yǎng)成分，因此使用低溫，可以使血清凝固，達(dá)到滅菌目的:(1)使用該法滅菌的血清等分裝時(shí)，必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，試管、平盤也必須在滅菌后使用.

(2)根據(jù)要求將培養(yǎng)基變成斜面和上層，加入足夠的水后，連接電源，升溫75~90℃1h滅菌，放入37℃的溫箱過夜，這樣滅菌3次.3.沸騰消毒:用煮鍋或沸騰消毒器，水沸騰后煮5~15次min，水中加入2%的煤酸煮5min，加入0.02%的甲醛，80℃煮60min達(dá)到滅菌目的，但在選擇沸騰消毒的增加消劑時(shí)，必須注意對物品的腐蝕性.
4.滅菌處理:滅菌后的物品，根據(jù)正常情況無菌，從滅菌器中取出時(shí)，必須仔細(xì)檢查放置，以免再次污染.

取出(1)物品，立即檢查包裝的完整性，破壞或棉塞脫落時(shí)，不得作為無菌物品使用.

(2)取出的物品，如果包裝有明顯的浸水者，不得作為無菌物品使用.

(3)培養(yǎng)基或試劑等，必須檢查是否符合滅菌后的顏色或狀態(tài)，未達(dá)到的人應(yīng)廢棄.

(4)啟閉式容器，取出時(shí)應(yīng)關(guān)閉篩孔.

(5)取出的物品掉落在地面或錯(cuò)誤地面，不潔凈的地面，不潔凈的液體，不能作為無塵物品使用的情況下).

三、有毒有菌污物處理要求微生物實(shí)驗(yàn)所用實(shí)驗(yàn)器材、

培養(yǎng)物等未經(jīng)消毒處理，一律不得帶出實(shí)驗(yàn)室.
1.培養(yǎng)的污染材料和廢棄物應(yīng)放置在嚴(yán)密的容器和鐵絲筐中，集中保管在指定的場所，統(tǒng)一進(jìn)行高壓滅菌.

2、經(jīng)過微生物污染的培養(yǎng)物，必須經(jīng)過121℃、30min高壓滅菌.
3.染菌后的吸管，使用后放入5%的煤酚肥皂溶液和石炭酸液中，至少浸泡24小時(shí)(消毒液不得低于浸泡高度)，經(jīng)過121℃、30min高壓滅菌.
4.涂層染色清洗層的液體，一般可直接沖入下水道，烈性菌的清洗液必須沖入杯子中，高壓滅菌后倒入下水道，染色的玻璃層浸入5%煤酚皂溶液中24小時(shí)后煮沸清洗.

做凝聚試驗(yàn)用的玻璃或平盤，必須在高壓滅菌后清洗.5.破碎的培養(yǎng)物，立即用5%的煤酚皂溶液或煤酸液噴灑和浸泡污染部位，浸泡30分鐘后擦拭干凈.污染的工作服和強(qiáng)烈試驗(yàn)穿的工作服、帽子、口罩等，必須放入專用的消毒袋中，用高壓滅菌后才能洗.

四、培養(yǎng)基制要求培養(yǎng)基制的質(zhì)量直接影響微生物的生長.

由于各種微生物對營養(yǎng)的要求不完全相同，培養(yǎng)目的不同，各種培養(yǎng)基礎(chǔ)的準(zhǔn)備要求如下:
1.根據(jù)培養(yǎng)基礎(chǔ)處方的成分量稱，溶于蒸餾水，使用前應(yīng)對應(yīng)用的試劑藥品進(jìn)行質(zhì)量檢查.
2.pH測定和調(diào)節(jié):pH測定必須在培養(yǎng)基冷到室溫時(shí)進(jìn)行.在熱或冷的情況下，pH有一定的不同，所以測定的情況下，在計(jì)算量中加入堿或酸混合后，再進(jìn)行測試.培養(yǎng)基pH值必須正確.否則，會(huì)影響微生物的成長和結(jié)果的觀察.但是，由于高壓滅菌會(huì)影響培養(yǎng)基的PH的下降和上升，因此滅菌壓力過高或次數(shù)過多不能影響培養(yǎng)基的質(zhì)量，指示劑、去氧膽酸鈉、瓊脂等一般在調(diào)整PH后加入.
3.培養(yǎng)基礎(chǔ)應(yīng)清晰，觀察細(xì)菌生長情況，培養(yǎng)基礎(chǔ)加熱煮沸后，可用脫脂棉或絨毛過濾，去除沉淀物，必要時(shí)可用蛋白清晰處理，使用的瓊脂棒應(yīng)事先清洗干凈后使用，以免瓊脂中含有雜質(zhì)影響透明度.
4.安裝培養(yǎng)基不得使用鐵、銅等容器.最好使用洗凈的中性硬質(zhì)玻璃容器.

5.培養(yǎng)基的滅菌要達(dá)到完全滅菌的目的，注意不要因加熱而降低營養(yǎng)價(jià)值.一般來說，121℃、15min即可.主要原因是:第一，防止實(shí)驗(yàn)操作中人為污染樣品.

五、確保工作人員的安全，

防止被檢測出的病原菌因操作不當(dāng)而造成個(gè)人污染.
1.無菌操作要求
1.接種細(xì)菌時(shí)必須穿工作服，戴工作帽.
2.接種食品樣品時(shí)，必須穿專用工作服、帽子和拖鞋，放在無菌室緩沖室，工作前用紫外線消毒使用.
3.接種食品樣品時(shí)，進(jìn)入無菌室前用肥皂洗手，用75%的酒精棉球擦手.
4.接種使用的吸管、平盤和培養(yǎng)基等必須消毒滅菌，打開未使用的盤子，放置后不能使用，金屬器具必須用高壓滅菌或95%的酒精燃燒3次后使用.
5.從包裝中取出吸管時(shí)，吸管的尖端不得接觸露出部位，使用吸管接觸試管或平盤時(shí)，吸管的尖端不得接觸試管或平盤的邊緣.
6.接種樣品、轉(zhuǎn)種細(xì)菌必須在酒精燈前操作，接種細(xì)菌或樣品時(shí)，吸管從包裝中取出后，打開試管塞必須用火焰消毒.
7.接種環(huán)和針在接種細(xì)菌前用火焰燒毀所有金屬線，必要時(shí)燒毀環(huán)和針與棒的連接部，接種結(jié)核菌和烈性菌的接種環(huán)在沸水中煮沸5min，用火焰燒毀.
8.吸管吸收菌液或樣品時(shí)，應(yīng)使用相應(yīng)的橡膠頭吸收，不得直接用口吸收.二.無菌之間的使用要求
1.無菌之間通向外部的窗戶必須是雙層玻璃，密封，無菌之間的大小不得隨意打開緩沖間和拉門，設(shè)置0.5-0.7m2的小窗戶，以備進(jìn)入無菌之間傳遞物品.
2.無菌之間應(yīng)保持潔凈，工作后用2%-3%的煤酚皂溶液消毒，擦拭工作臺(tái)面，不得存放與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的物品.3.在無菌之間使用前后關(guān)閉門，打開紫外線燈室內(nèi)懸掛紫外線燈消毒時(shí)，需要30W紫外線燈，距離1.0m，照射時(shí)間在30min以上，使用紫外線燈時(shí)，請注意不要直接在紫外線下操作，以免損傷4.處理和接種食品標(biāo)本時(shí)，進(jìn)入無菌間操作，不得隨意進(jìn)出.如果需要傳遞物品，可以在窗戶上傳遞.5.無菌之間需要設(shè)置空調(diào)時(shí)，需要過濾裝置.

六、消毒滅菌要求微生物檢測用玻璃器具、

金屬器具和培養(yǎng)基、污染和接種的培養(yǎng)物等，必須滅菌后使用.

(1)干熱和濕熱高壓蒸汽鍋的滅菌方法1.

滅菌前準(zhǔn)備好的(1)所有需要滅菌的東西都要先洗干凈，玻璃器具如吸管、平盤用紙包裝嚴(yán)密，用金屬筒打開上面的通氣孔.

(2)安裝培養(yǎng)基的三角瓶塞，用紙包好，試管蓋好，注射器抽出管芯，用紗布包好.2.放置(1)干熱滅菌器:放置物品不能擠壓，也不能接觸箱子的四壁.

(2)大型高壓蒸汽鍋:放置滅菌物分別包裹，直接放入消毒筒內(nèi)，物品之間不得擠壓.3.設(shè)備檢查(1)檢查門開關(guān)是否靈活，橡膠圈是否損壞，是否平整.

(2)檢查壓力表蒸汽排出時(shí)是否停留在零位置，關(guān)閉門和蓋子，蒸汽和加熱后，觀察空氣是否泄漏，壓力表和溫度計(jì)表示的情況是否一致，管道是否堵塞.

(3)對于有自動(dòng)電子程序控制裝置的滅菌器，在使用前檢查規(guī)定的程序，是否符合滅菌處理的要求.4.滅菌處理(1)干熱滅菌法:該方法適用于干熱時(shí)不破損、不變質(zhì)、不蒸發(fā)的物品、玻璃器皿、金屬制品、陶瓷制品等滅菌.

①器械容器清洗后干燥，以免附著在表面的污垢炭化.

②滅菌時(shí)放置物品不要擠壓，不要直接接觸底部和箱壁，物品之間留有間隙.

③菌時(shí)關(guān)閉箱門，接通電源，首先打開排氣孔約30min，排除滅菌器中的冷空氣，溫度上升到160℃調(diào)節(jié)指示燈，維持1.5?2小時(shí).④滅菌結(jié)束后或溫度上升時(shí)，必須在60℃以下打開箱門.

(2)手提式高壓鍋或立式壓力蒸汽滅菌器的使用應(yīng)按以下步驟進(jìn)行:
①手提式高壓鍋在主體內(nèi)加入3L清水，立式高壓鍋加水16L(重復(fù)使用時(shí)補(bǔ)充水量，水變混濁需要更換).

②手提式壓力鍋將頂蓋的排氣管插入消毒罐內(nèi)壁的方管中(無軟管或軟管銹蝕破裂的滅菌器不得使用).

③蓋上蓋子擰緊，不漏氣的滅菌器放在火源上加熱，立式壓力鍋通過電源，打開頂蓋的排氣閥放入冷氣閥(水沸騰后排氣閥10-15min)的滅菌器.

③蓋子擰緊頂蓋子，不漏氣的滅氣的滅氣體壓力，放入火源，立即取消除壓力，立即取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力.

⑤取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力，取消壓力.

②夾層達(dá)到預(yù)定溫度后，打開鍋室進(jìn)氣閥，將蒸汽引入鍋室，鍋室內(nèi)冷空氣經(jīng)鍋室阻氣器自動(dòng)排出.

③鍋室達(dá)到規(guī)定的壓力和溫度時(shí)，調(diào)節(jié)吸氣閥，保持恒定④自然或人工冷卻到60℃后開門取物，不得使用快速排出蒸汽法，以免突然降壓，液體劇烈沸騰或容器爆破.

⑤使用自動(dòng)程序控制式壓力蒸汽滅菌器，放置物品關(guān)閉門后，根據(jù)物品類別按下相應(yīng)的開關(guān)，按要求自動(dòng)滅菌，滅菌時(shí)必須使用附屬儀表記錄溫度和時(shí)間，操作要求嚴(yán)格按照制造商的說明書進(jìn)行.5.滅菌溫度和時(shí)間(1)干熱滅菌器滅菌溫度為160℃，為1.5-2h.(2)壓力蒸汽滅菌鍋的滅菌溫度和時(shí)間(2)間歇性滅菌方法1.滅菌方法1.滅菌方法系:壓力不大的蒸汽進(jìn)行滅菌，有些物質(zhì)通過高壓蒸汽滅菌容易破壞，可以用這種方法滅菌.

(1)將想要滅菌的東西放入鍋中，蓋上蓋子，打開排水口，排出器內(nèi)的馀水.

(2)關(guān)閉排水口，打開進(jìn)氣門，必要時(shí)消毒10~20min.

(3)滅菌后關(guān)閉進(jìn)氣門，取出物品冷卻到室溫，放入37℃的溫箱過夜，第二天用上述方法消毒，這樣3次就能達(dá)到滅菌的目的.2.血清凝固器的使用方法:如果培養(yǎng)基中含有血清和蛋的特殊成分，高熱會(huì)破壞營養(yǎng)成分，因此使用低溫，可以使血清凝固，達(dá)到滅菌目的:(1)使用該法滅菌的血清等分裝時(shí)，必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，試管、平盤也必須在滅菌后使用.

(2)根據(jù)要求將培養(yǎng)基變成斜面和上層，加入足夠的水后，連接電源，升溫75~90℃1h滅菌，放入37℃的溫箱過夜，這樣滅菌3次.3.沸騰消毒:用煮鍋或沸騰消毒器，水沸騰后煮5~15次min，水中加入2%的煤酸煮5min，加入0.

02%的甲醛，80℃煮60min達(dá)到滅菌目的，但在選擇沸騰消毒的增加消劑時(shí)，必須注意對物品的腐蝕性.4.滅菌處理:滅菌后的物品，根據(jù)正常情況無菌，從滅菌器中取出時(shí)，必須仔細(xì)檢查放置，以免再次污染.

取出(1)物品，立即檢查包裝的完整性，破壞或棉塞脫落時(shí)，不得作為無菌物品使用.

(2)取出的物品，如果包裝有明顯的浸水者，不得作為無菌物品使用.

(3)培養(yǎng)基或試劑等，必須檢查是否符合滅菌后的顏色或狀態(tài)，未達(dá)到的人應(yīng)廢棄.

(4)啟閉式容器，取出時(shí)應(yīng)關(guān)閉篩孔.

(5)取出的物品掉落在地面或錯(cuò)誤地面，不潔凈的地面，不潔凈的液體，不能作為無塵物品使用的情況下).

四、有毒有菌污物處理要求微生物實(shí)驗(yàn)所用實(shí)驗(yàn)器材
培養(yǎng)物等未經(jīng)消毒處理，一律不得帶出實(shí)驗(yàn)室.
1.培養(yǎng)的污染材料和廢棄物應(yīng)放置在嚴(yán)密的容器和鐵絲筐中，集中保管在指定的場所，統(tǒng)一進(jìn)行高壓滅菌.

2、經(jīng)過微生物污染的培養(yǎng)物，必須經(jīng)過121℃、30min高壓滅菌.3.染菌后的吸管，使用后放入5%的煤酚肥皂溶液和石炭酸液中，至少浸泡24小時(shí)(消毒液不得低于浸泡高度)，經(jīng)過121℃、30min高壓滅菌.
4.涂層染色清洗層的液體，一般可直接沖入下水道，烈性菌的清洗液必須沖入杯子中，高壓滅菌后倒入下水道，染色的玻璃層浸入5%煤酚皂溶液中24小時(shí)后煮沸清洗.

做凝聚試驗(yàn)用的玻璃或平盤，必須在高壓滅菌后清洗.5.破碎的培養(yǎng)物，立即用5%的煤酚皂溶液或煤酸液噴灑和浸泡污染部位，浸泡30分鐘后擦拭干凈.

污染的工作服和強(qiáng)烈試驗(yàn)穿的工作服、帽子、口罩等，必須放入專用的消毒袋中，用高壓滅菌后才能洗

七、培養(yǎng)基制要求培養(yǎng)基制的質(zhì)量直接影響微生物的生長.

由于各種微生物對營養(yǎng)的要求不完全相同，培養(yǎng)目的不同，各種培養(yǎng)基礎(chǔ)的準(zhǔn)備要求如下:
1.根據(jù)培養(yǎng)基礎(chǔ)處方的成分量稱，溶于蒸餾水，使用前應(yīng)對應(yīng)用的試劑藥品進(jìn)行質(zhì)量檢查.
2.pH測定和調(diào)節(jié):pH測定必須在培養(yǎng)基冷到室溫時(shí)進(jìn)行.在熱或冷的情況下，pH有一定的不同，所以測定的情況下，在計(jì)算量中加入堿或酸混合后，再進(jìn)行測試.培養(yǎng)基pH值必須正確.